2010-20-1.pdf
国家自然科学基金资助项目
摘要:目的构建小鼠FasL基因和屋尘螨主要抗原Derp2双基因共表达载体,并检测其在树突状细胞(DC)中的表达。方法以plambdDerp2为模板扩增Derp2基因,双酶切pIRES2EGFP和Derp2基因,将Derp2基因克隆入pIRES2EGFP得pIRES2EGFPDerp2。双酶切pMD18TFasL质粒获得FasL片段,克隆入pIRES2EGFPDerp2,获得FasL和Derp2共表达重组载体pIRES2EGFPFasLDerp2,采用酶切及测序鉴定重组质粒。将重组质粒转染DC,采用RTPCR和WesternBlot法检测FasL和Derp2基因的mRNA及蛋白水平的表达。结果测序证实FasL和Derp2基因序列完全正确。重组质粒转染DC后,能表达FasL和Derp2的mRNA和蛋白。结论成功构建FasL和Derp2双基因共表达重组载体pIRES2EGFPFasLDerp2,转染DC后能在体外正确表达FasL和Derp2基因。
王彦,吴奎,毕玉田,等. FasL和Derp2双基因共表达真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达[J].重庆医学,2010,(20):