摘要：目的构建含胸苷激酶基因（TK自杀基因）的pGEX4T2TK原核表达质粒，观察其在大肠杆菌中表达情况，为肿瘤基因治疗奠定基础。方法聚合酶链式反应（PCR）扩增TK基因片段，利用限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ将其连接至原核表达载体pGEX4T2内，再将连接产物转化入大肠杆菌，挑取单菌落，提取质粒，经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌培养过夜，异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后观察蛋白表达情况。结果TK基因片段成功连接至载体pGEX4T2中，在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的目的蛋白。结论pGEX4T2TK原核表达质粒构建成功，为后续肿瘤基因治疗研究奠定了基础。