摘要：目的建立成年大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ细胞）分离、纯化、原代培养和鉴定的技术方法，并观察其体外生长特性及SPA表达情况。方法将0.08%胰蛋白酶消化液从气管注入肺组织，消化分离ATⅡ细胞。将大鼠IgG包被的培养皿免疫吸附纯化后，进行原代培养。用倒置相差显微镜观察细胞生长情况，透射电镜(TEM )鉴定细胞，改良巴式染色法鉴定并计算细胞纯度，MTT法检测细胞增殖情况，Western blot检测细胞表达SPA动态变化。结果细胞产量约为2.2×107个/只大鼠。电镜下观察到ATⅡ细胞特征性结构——板层小体；纯度大于 90%。体外培养36～72 h时细胞生长良好，细胞质内有较多颗粒；96 h后细胞呈长索形，细胞内颗粒减少，并出现空泡。ATⅡ细胞表达SPA在36 h左右达高峰，之后表达减弱。结论利用0.08%胰蛋白酶消化分离和大鼠IgG免疫吸附纯化可获得满意的原代ATⅡ细胞。培养36～72 h时细胞增殖旺盛，生长良好，SPA表达丰富，是进行体外实验的良好时期。