目的调查医护人员结核菌素皮肤试验(TST)相关知识的掌握情况，为今后提升基层医护人员TST筛查规范性提供依据。方法对2023年重庆市27个区县248名具有执业医师或护士资格且承担TST工作的医护人员进行TST相关知识知晓情况问卷调查，统计调查对象TST相关知识的知晓情况，分析其影响因素。结果248名医护人员TST相关知识平均得分为(78.3±10.6)分。TST相关知识总知晓率为78.9%(8 213/10 416)，其中TB常识方面知晓率为65.4%(1 135/1 736)、TST常识方面知晓率为87.3%(3 248/3 720)、TST原理方面知晓率为53.4%(795/1 488)、TST操作方面知晓率为88.0%(1 964/2 232)、TST结果判读方面知晓率为86.4%（1 071/1 240）。护士的知晓率高于医师和其他（P>0.05），中疫情地区医护人员的知晓率高于高疫情地区和低疫情地区（P＜0.001）。TST相关知识知晓达标组和未达标组不同性别、年龄、职业类型、单位类型和区域疫情等级比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论医护人员TST相关知识掌握不全面，为规范TST的应用，应加强对TST相关知识的培训。